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    凍存細(xì)胞的這些坑,你踩過嗎?

    發(fā)布時間: 2021-09-23  點(diǎn)擊次數(shù): 1898次

    凍存細(xì)胞的錯誤時機(jī)主要有:細(xì)胞量太少,細(xì)胞狀態(tài)不好,細(xì)胞變形嚴(yán)重,或者細(xì)胞生長堆積,一旦生長過平頂期,培養(yǎng)基就會變得很黃,細(xì)胞可疑污染;鏡下觀察細(xì)胞有很多碎片或者不明物;培養(yǎng)時間過長,連續(xù)培養(yǎng)超過二個月,細(xì)胞性狀已有改變。

    選擇細(xì)胞凍存的最佳時機(jī):細(xì)胞增殖旺盛,情況穩(wěn)定,試驗(yàn)效果良好,復(fù)蘇后兩周內(nèi)開始凍存一批,再往下傳的用來做實(shí)驗(yàn)。


    細(xì)胞太少

    凍存時細(xì)胞濃度低于1- 5*10^5CELL/VIAL,復(fù)蘇很難成功,原因:細(xì)胞和細(xì)胞間會又間隙接觸反應(yīng), 解決:離心后調(diào)整細(xì)胞濃度,把細(xì)胞種更小的孔板中.


    培養(yǎng)基很黃,凍存細(xì)胞后復(fù)蘇不長

    在細(xì)胞生長平頂期凍存的細(xì)胞會在解凍后有幾天停滯狀態(tài),原因:細(xì)胞在生長平頂期已經(jīng)停止生長,凍存后也保持互相間抑制的信號,解決辦法:用胰酶消化重新鋪板;


    細(xì)胞污染或者很多小黑點(diǎn)

    凍存管的蓋子一定要擰緊,否則復(fù)蘇水浴時會滲水,造成污染。復(fù)蘇細(xì)胞的時候盡量避免凍存管接縫處沾水,防止支原體污染,實(shí)驗(yàn)室定期用過氧化氫熏蒸,細(xì)胞小黑點(diǎn)增多時用支原體檢測試劑盒檢測,并且及時清除,趁高溫假給細(xì)胞來次清潔吧,支原體去除試劑,*防止支原體污染好幫手


    程序降溫盒導(dǎo)致的細(xì)胞復(fù)蘇不活

    放在-80 度的凍存盒,壁太薄,細(xì)胞在被迅速降溫,使用普通的凍存液抗氧化和抗凍添加物不夠,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量冰晶殺死細(xì)胞.

    推薦品牌無血清細(xì)胞凍存液,凍存液含有抗氧化因子,可在細(xì)胞凍存時防止細(xì)胞產(chǎn)生氧化反應(yīng),給細(xì)胞一個好的休眠環(huán)境,含有抗凍組分,讓大部分細(xì)胞免受冰晶殺戮,好不好用一下就知道!


    -80°存放太久導(dǎo)致的細(xì)胞復(fù)蘇不好

    原因:冰箱的溫度難以恒定:開門 / 關(guān)門過于頻繁,冰箱電壓不穩(wěn)等.解決辦法:盡快轉(zhuǎn)入液氮。


    液氮不足

    液面不能漫過所有細(xì)胞。解決:定期測量液氮儲備,保證細(xì)胞全部浸在液面下,小提醒:有幾個細(xì)胞需要?dú)庀啾4娴?,不能浸入液氮里,挪?xì)胞的時候需要注意一下。


    取錯細(xì)胞

    找不到 / 拿錯凍存管。原因:沒有標(biāo)記好細(xì)胞,沒有做好庫存記錄,解決:凍存細(xì)胞時在每支凍存管都標(biāo)上細(xì)胞的名稱,凍存時間,并記錄在冊。

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